1965年Bangham等首次發(fā)現(xiàn)，將磷脂分子分散在水性溶液中，磷脂分子會自發(fā)形成封閉的雙層囊泡，隨后，由磷脂雙分子層構(gòu)成的封閉球狀囊泡被稱之為脂質(zhì)體。脂質(zhì)體的發(fā)現(xiàn)引起了科學(xué)家們的廣泛的興趣。脂質(zhì)體內(nèi)的親水環(huán)境可以包裹親水性藥物，而構(gòu)成脂質(zhì)體的磷脂分子層之間則可以裝載親脂性藥物。脂質(zhì)體作為載體具有生物膜結(jié)構(gòu)，免疫原性低，能夠延長藥物半衰期，降低藥物毒性，并且可提高藥物傳遞效率。自脂質(zhì)體獲得研究學(xué)者們關(guān)注的五六十年來，通過對脂質(zhì)體的處方設(shè)計(jì)、結(jié)構(gòu)修飾、制備工藝的進(jìn)一步創(chuàng)新，傳統(tǒng)脂質(zhì)體的穩(wěn)定性差、包封率低等問題被逐漸解決，脂質(zhì)體在藥物遞送方面的應(yīng)用不斷被拓展，涵蓋了抗腫瘤、抗真菌、鎮(zhèn)痛、疫苗及光動力療法等多個治療領(lǐng)域。近幾年來，我國多家藥企也成功開發(fā)并上市了幾種脂質(zhì)體制劑，如紫杉醇脂質(zhì)體注射液、多柔比星脂質(zhì)體注射液，兩性霉素B脂質(zhì)體注射液等。由于不同的處方及制備工藝對脂質(zhì)體藥物的安全性和有效性會產(chǎn)生不同的影響，因此了解脂質(zhì)體藥物的關(guān)鍵質(zhì)量屬性并建立有效的質(zhì)量控制策略十分有必要，本文結(jié)合國內(nèi)外已上市的脂質(zhì)體產(chǎn)品，對脂質(zhì)體藥物的制備工藝及系統(tǒng)的質(zhì)量評價方法進(jìn)行綜述，為脂質(zhì)體給藥技術(shù)的開發(fā)和質(zhì)量評價提供參考。

要想使脂質(zhì)體制劑達(dá)到良好的臨床效果，離不開對脂質(zhì)體制備工藝的研究，藥物制備工藝的微小變化會對脂質(zhì)體制劑的安全性和有效性產(chǎn)生重要的影響。薄膜水合法、溶劑注入法、復(fù)乳法、主動載藥法、微流體技術(shù)等均為脂質(zhì)體的制備方法，用于生產(chǎn)不同粒徑、結(jié)構(gòu)和功能的脂質(zhì)體藥物。

1.1 薄膜水合法

薄膜水合法是制備脂質(zhì)體的傳統(tǒng)方法之一，該方法是將脂質(zhì)和有機(jī)溶劑如氯仿混合，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)或其他方法去除有機(jī)溶劑，在形成的脂質(zhì)薄膜中加入親水性介質(zhì)如磷酸鹽緩沖液，脂質(zhì)則自發(fā)水合聚集形成非均質(zhì)化的較大粒徑的脂質(zhì)體，且通常為多層結(jié)構(gòu)，通過結(jié)合超聲和膜擠壓法可以減小脂質(zhì)體粒徑，得到粒徑較為均一的脂質(zhì)體。雖然該方法較為成熟，設(shè)備簡單，但由于方法使用了有害的有機(jī)溶劑，如氯仿和甲醇，這些化學(xué)物質(zhì)的殘留物可能會留在最后的脂質(zhì)體制劑中，造成潛在的毒性。為了避免有毒試劑的使用，Mortazavi等提出采用改進(jìn)的加熱法制備脂質(zhì)體，將脂質(zhì)體的各組成成分二棕櫚酸磷脂酰膽堿（DPPC）、雙十六烷基磷酸（DPC）、膽固醇分別在磷酸鹽緩沖液中室溫下水合2h，然后在膽固醇混懸液中加入甘油（3%，v/v），加熱到120℃并攪拌20min，隨后將溫度降低至60℃，將脂質(zhì)體的其他組成成分加入到膽固醇混懸液中，攪拌后放置室溫30min脂質(zhì)體即可形成。該方法不涉及有毒試劑的使用，無需高剪切力的均質(zhì)化和超聲處理，制備的陰離子脂質(zhì)體-Ca²⁺-DNA三元復(fù)合物的包封率高達(dá)81%。如今，除了傳統(tǒng)的薄膜水合法，已經(jīng)衍化出了多種快速、無需有機(jī)溶劑、無需均質(zhì)化處理的水合法。

1.2 溶劑注入法

溶劑注入法是將磷脂和膽固醇溶解在乙醇或乙醚中制成有機(jī)相，在磁力攪拌下用注射泵將有機(jī)相注入一定體積的水相中，當(dāng)有機(jī)溶劑和水相接觸時脂質(zhì)體因其避水作用而自發(fā)形成，最后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除脂質(zhì)體中的有機(jī)溶劑。脂質(zhì)濃度、攪拌速度、注射流量、溶劑的注入量、溫度等參數(shù)均會影響脂質(zhì)體粒徑。例如，Jaafar-Maalej等采用乙醇注入法成功制備了包裹親脂和親水性藥物的脂質(zhì)體制劑，并研究了關(guān)鍵工藝參數(shù)和配方參數(shù)對脂質(zhì)體的影響，結(jié)果表明，水相的攪拌速率和有機(jī)相中磷脂的濃度是影響脂質(zhì)體大小的關(guān)鍵參數(shù)。Gentine等采用優(yōu)化后的乙醇注入法，將含有脂質(zhì)的乙醇溶液加熱至60℃（高于脂質(zhì)的相轉(zhuǎn)變溫度），注入到70℃的水相中，攪拌后乙醇通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除。該優(yōu)化的乙醇注入法能夠有效的控制脂質(zhì)體粒徑，結(jié)果顯示當(dāng)乙醇的體積比為33%（v/v）時，脂質(zhì)濃度、脂質(zhì)電荷和水相類型對囊泡直徑影響不大。

1.3 復(fù)乳法

復(fù)乳法又叫二次乳化法，是指將脂質(zhì)溶于適量有機(jī)溶劑并按比例加入少量水相，超聲或震蕩后得到W/O的乳化液，然后再加入大量水相溶液，進(jìn)行第2次乳化，得到W/O/W的乳化液，最后通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除多余的有機(jī)溶劑和水相即可。復(fù)乳法是制備多囊脂質(zhì)體的常用方法，Luo等通過復(fù)乳法制備了齊墩果酸多囊脂質(zhì)體，在體內(nèi)和體外均表現(xiàn)出緩釋的效果；Sun等通過Depofoam復(fù)乳法制備的鹽酸納曲酮多囊脂質(zhì)體，體內(nèi)研究表明血藥濃度能較恒定地保持在10ng·mL^-1以上約120h。美國制藥公司推出的一項(xiàng)多囊脂質(zhì)體制備技術(shù)的專利———Depofoam技術(shù)中就采用了復(fù)乳法，該技術(shù)開發(fā)20多年來成功應(yīng)用于多個上市脂質(zhì)體制劑，如阿糖胞苷脂質(zhì)體注射液、硫酸嗎啡緩釋脂質(zhì)體注射液、布比卡因脂質(zhì)體注射液等。由復(fù)乳法制備的多囊脂質(zhì)體，由于結(jié)構(gòu)的特殊性，其粒徑較普通脂質(zhì)體的粒徑更大，通常在5~50μm范圍內(nèi)。

1.4 主動載藥法

上述的脂質(zhì)體制備方法均為被動載藥法，而主動載藥法是利用脂質(zhì)體內(nèi)外水相的pH梯度或離子梯度，使水溶性或兩親性藥物主動跨過脂質(zhì)分子層進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)部水相中。主動載藥法對水溶性藥物和兩親性藥物具有較高的包封率。pH梯度法、硫酸銨梯度法、醋酸鈣梯度法等均是用于包封弱堿性和弱酸性藥物的脂質(zhì)體制備方法。在主動載藥法中，跨膜梯度（pH梯度/離子梯度）、孵育溫度和時間、藥脂比、藥物油水分配系數(shù)的對數(shù)值（logP）和酸度系數(shù)（pKa）等均為主動載藥的影響因素。多柔比星脂質(zhì)體制劑Doxil?采用了硫酸銨梯度法制備，包封率達(dá)到97%左右。FDA批準(zhǔn)上市的伊立替康脂質(zhì)體Onivyde^?、阿糖胞苷和柔紅霉素復(fù)合脂質(zhì)體Vyxeos^?等也均采用主動載藥法制備。

1.5 微流體技術(shù)

由于傳統(tǒng)的脂質(zhì)體生產(chǎn)方法如薄膜水合法、溶劑注入法主要依賴于脂質(zhì)在溶劑中的自發(fā)聚集，該過程是不可控的，因此合成的脂質(zhì)體是多分散和多層的，通常需要通過擠壓、超聲或高壓均質(zhì)化進(jìn)行進(jìn)一步的處理。而微流體技術(shù)是一種多功能的脂質(zhì)體制備技術(shù)，脂相和水相在不同的入口通過1個直徑數(shù)十至數(shù)百微米的通道，脂相流在水動力作用下聚焦成1個狹窄的薄片，通過調(diào)整水相和脂相的體積流速比、流體通道的長度、溫度、混合條件、脂質(zhì)濃度，實(shí)現(xiàn)可變的脂質(zhì)體粒徑（幾十納米到幾百微米）和較窄的粒徑分布。Elsana等分別采用薄膜水合法和微流體法制備了新型陽離子脂質(zhì)體，結(jié)果表明，與薄膜水合法制備的脂質(zhì)體相比，微流體法制備的脂質(zhì)體具有更小、更均勻的粒徑和Zeta電位，并且包封效率更高。Deng等利用表面活性劑輔助的微流體技術(shù)制備單分散的單室和多室脂質(zhì)體，實(shí)現(xiàn)了高產(chǎn)率、高通量地生產(chǎn)單層和多層脂質(zhì)體。

1.6 超臨界流體技術(shù)

由于超臨界流體（通常選用經(jīng)濟(jì)無毒的CO₂）在臨界點(diǎn)具有氣、液兩相的特點(diǎn)，即黏度低，密度大，有良好的流動性和溶解特性，在脂質(zhì)體制備方面有著特殊的優(yōu)勢。超臨界流體可用作脂質(zhì)的溶劑或分散劑，當(dāng)作為溶劑時，能夠代替有機(jī)溶劑的使用，使脂相與水相結(jié)合，通過改變壓力和溫度使CO₂成為氣體而除去，從而避免有機(jī)溶劑在終產(chǎn)品中的殘留；當(dāng)作為分散劑時，分散在純水中的脂質(zhì)通過超臨界流體加壓，使脂質(zhì)在介質(zhì)中由于碰撞和剪切力而分散得更好。不僅如此，超臨界流體技術(shù)具有快速簡單的一步制備過程，通過對重要參數(shù)如脂質(zhì)濃度、分散體積、壓力和溫度等的控制，能夠制備并且工業(yè)化生產(chǎn)具有特定理化性質(zhì)的脂質(zhì)體。多種超臨界流體技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于脂質(zhì)體的制備，如注射減壓法、超臨界反溶劑法、超臨界溶液快速膨脹法、超臨界流體逆相蒸發(fā)法等。為了簡化兩性霉素B脂質(zhì)體的制備方法，降低生產(chǎn)成本，Lim等采用超臨界反溶劑法制備了兩性霉素B脂質(zhì)體，粒徑在100~150nm，包封率約90%，且凍干前后脂質(zhì)體的粒徑、包封率、粒徑分布均無明顯變化，由此表明，用該方法制備的脂質(zhì)體粒徑均一，穩(wěn)定性強(qiáng)，可作為制備兩性霉素脂質(zhì)體的潛在方法。

隨著脂質(zhì)體用于藥物遞送研究的不斷發(fā)展，為了規(guī)范化脂質(zhì)體藥物的研發(fā)和上市審批過程，EMA和FDA均發(fā)布了相關(guān)的技術(shù)指南和要求。FDA指南中指出，脂質(zhì)體制劑的理化性質(zhì)包括脂質(zhì)體形態(tài)、表面特征如聚乙二醇（PEG）化、表面電荷、粒徑和粒徑分布、相轉(zhuǎn)變溫度、藥物包封率與載藥量、體外釋放率、泄露率等，能夠反映藥物的安全性和有效性，以上理化參數(shù)的改變將會導(dǎo)致藥物質(zhì)量的變化，因此在脂質(zhì)體制劑的研發(fā)和生產(chǎn)過程中需要嚴(yán)格控制其理化參數(shù)尤其是關(guān)鍵質(zhì)量屬性的變化。

2.1 脂質(zhì)體的表面電荷

脂質(zhì)體的表面電荷會影響脂質(zhì)體的硬度、穩(wěn)定性和聚集狀態(tài)，用帶電荷的脂質(zhì)制備脂質(zhì)體時，由于靜電斥力的存在，脂質(zhì)體穩(wěn)定性良好，不易發(fā)生聚集；而在體內(nèi)，表面電荷也會影響脂質(zhì)體的腫瘤靶向性和細(xì)胞攝取過程。由于生物膜的負(fù)電性，陽離子脂質(zhì)體能促進(jìn)脂質(zhì)體與生物膜的融合，從而有利于包封藥物的釋放，但也可能由于被包封藥物的性質(zhì)而影響與生物膜的相互作用。Hoffmann等發(fā)現(xiàn)，將核酸包裹于帶正電荷的膜融合脂質(zhì)體中，核酸的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率很低，這可能是由于帶負(fù)電荷的核酸和陽離子脂質(zhì)體的相互作用減弱了脂質(zhì)體與細(xì)胞表面的相互吸引，從而降低了核酸向胞內(nèi)的轉(zhuǎn)移。將核酸和帶正電荷的分子組成復(fù)合物中和了核酸的負(fù)電荷后，脂質(zhì)體的膜融合和核酸轉(zhuǎn)染效率大大增加。表面電荷的測定方法通常有電泳法、電滲法及超聲波法，Zeta電位常被用于評估脂質(zhì)體的表面電荷特征，Smith等考察了Zeta電位對帶電脂質(zhì)體的敏感性，采用不同的帶電脂質(zhì)制備陽離子、陰離子和中性脂質(zhì)體，發(fā)現(xiàn)Zeta電位值與脂質(zhì)體內(nèi)帶電脂質(zhì)摩爾百分比之間有很強(qiáng)的線性關(guān)系，并且，在pH分別為7.7、5.8、3.8的條件下測定脂質(zhì)體的Zeta電位時，隨著pH的降低，脂質(zhì)體的Zeta電位負(fù)值逐漸減小，這說明在酸性條件下帶電脂質(zhì)的質(zhì)子化程度增強(qiáng)；而在不同濃度的氯化鈉溶液（0.01、0.02、0.03mol·L^-1）中測定時，隨著離子強(qiáng)度的增加，脂質(zhì)體的Zeta電位負(fù)值也逐漸減小。以上結(jié)果表明，測量環(huán)境的pH、離子強(qiáng)度的微小變化會對Zeta電位產(chǎn)生很大的影響。

2.2 脂質(zhì)體的粒徑大小和分布

脂質(zhì)體的粒徑可以從幾十納米到幾十微米不等，這取決于不同的制備方法和實(shí)際應(yīng)用。脂質(zhì)體的大小和粒徑分布是脂質(zhì)體的重要理化特性，會對藥物的載藥量和體內(nèi)藥代動力學(xué)產(chǎn)生影響，包括細(xì)胞攝取、組織分布和循環(huán)半衰期等。粒徑過大，會導(dǎo)致微粒被吞噬的速度加快，循環(huán)時間縮短；粒徑過小則藥物包封率降低，釋放加快，滲透性增加。同時，在脂質(zhì)體的靶向性方面，Joshi等發(fā)現(xiàn)200nm的陽離子脂質(zhì)體比80nm的陽離子脂質(zhì)體的腫瘤組織靶向性更高，這是因?yàn)樵谝欢椒秶鷥?nèi)，較大的顆粒表面積與腫瘤血管內(nèi)皮的黏附作用更大。Ong等研究了脂質(zhì)體粒徑對灰黃素脂質(zhì)體口服生物利用度的影響，結(jié)果表明，較小尺寸的脂質(zhì)體生物利用度比較大尺寸的脂質(zhì)體高約3倍，但繼續(xù)降低脂質(zhì)體粒徑（400nm以下）不會改善藥物的生物利用度。除此之外，有研究表明不同粒徑的脂質(zhì)體顆粒還會誘導(dǎo)不同的免疫反應(yīng)。

脂質(zhì)體的粒徑分布可以通過多種儀器技術(shù)進(jìn)行分析，2020年版《中華人民共和國藥典》中收載了原料藥和制劑的粒度和粒度分布測定法，包括顯微鏡法、篩分法、光散射法147。對于單分散的脂質(zhì)體，應(yīng)用廣泛的微粒檢測技術(shù)包括基于光譜的激光衍射、動態(tài)光散射技術(shù)以及基于顯微成像的掃描電鏡、透射電鏡、原子力顯微鏡等。對于多分散脂質(zhì)體，也有許多結(jié)合粒徑的分離技術(shù)共同用于脂質(zhì)體尺寸分布的表征，如尺寸排阻色譜、毛細(xì)管電泳技術(shù)等，Singh等采用了一種多光譜的高級納米顆粒跟蹤技術(shù)，可以準(zhǔn)確測量50~2000nm的多分散樣品中的顆粒大小。

2.3 脂質(zhì)及其降解產(chǎn)物的測定

磷脂和膽固醇是構(gòu)成脂質(zhì)體的重要非活性成分，大豆卵磷脂（SPC）、氫化大豆磷脂酰膽堿（HSPC）、二硬脂酰磷脂酰膽堿（DSPC）、二油酰磷脂酰膽堿（DOPC）、二棕櫚酰磷脂酰甘油（DPPG）等均是已上市脂質(zhì)體制劑中常用到的磷脂類化合物，磷脂和膽固醇的比例能調(diào)節(jié)脂質(zhì)體膜的流動性和相變溫度，從而影響脂質(zhì)體的形狀、包封率和體內(nèi)的滲透率。然而，磷脂在生產(chǎn)和貯存過程中容易發(fā)生水解反應(yīng)，產(chǎn)生降解產(chǎn)物溶血磷脂和脂肪酸，在人體正常情況下，溶血磷脂在細(xì)胞膜中的含量≤3%，濃度范圍是12~166μmol·L^-1，當(dāng)溶血磷脂濃度過高時，會導(dǎo)致細(xì)胞膜破裂，產(chǎn)生溶血或細(xì)胞壞死，因此檢測脂質(zhì)體中膽固醇、磷脂及其降解產(chǎn)物的含量是很有必要的。由于膽固醇和磷脂類化合物極性小且無紫外吸收，不能使用常規(guī)的紫外檢測器檢測，文獻(xiàn)中報(bào)道的檢測方法是采用通用型檢測器進(jìn)行測定：示差折光檢測器（RID）、蒸發(fā)光檢測器（ELSD）、電噴霧檢測器（CAD）等。彭佩等采用HPLC-ELSD法同時測定了復(fù)合磷脂脂質(zhì)體中SPC、HSPC和膽固醇的含量，結(jié)果表明該方法精密度和回收率高，能夠快速、準(zhǔn)確地測定上述脂質(zhì)的含量。李晗等采用HPLC-CAD法對長春瑞濱熱敏脂質(zhì)體中的溶血磷脂進(jìn)行檢測，和其他通用檢測器相比，電噴霧檢測器無需對待測組分進(jìn)行前處理，靈敏度高，對復(fù)雜組分和微量降解產(chǎn)物均可達(dá)到檢測要求。

2.4 包封率

包封率是評價納米載體的重要參數(shù)，包封率的大小會直接影響用藥的劑量和藥物在體內(nèi)的療效。脂質(zhì)體的組成成分和比例、包封藥物的性質(zhì)以及制備工藝均可影響脂質(zhì)體包封效率。脂質(zhì)體的包封率是指包裹在脂質(zhì)體中的藥量占總藥量的百分比，測定包封率時，關(guān)鍵的一步是將脂質(zhì)體制劑中的游離藥物和脂質(zhì)體分離而不造成脂質(zhì)體的破壞，張藝等就脂質(zhì)體包封率的前處理方法進(jìn)行了詳細(xì)介紹，包括離心法、透析反透析法、葡聚糖凝膠柱法和微柱離心法等。

不同的分離方法會對包封率的測定產(chǎn)生不同的影響，有研究表明，在采用尺寸排阻色譜、固相萃取法、離心超濾法、中空纖維離心超濾法測定兩性霉素B脂質(zhì)體包封率時，4種方法的測定結(jié)果有很大差異，測得包封率結(jié)果分別為93%、5%~13%、100%、99%，采用固相萃取法結(jié)果明顯降低的原因在于，C₁₈固定相容易吸附脂質(zhì)體表面的脂質(zhì)，導(dǎo)致游離藥物與脂質(zhì)體的分離效果變差，包封率降低。因此在選擇分離方法時需要綜合考慮包封藥物、脂質(zhì)體成分以及分離介質(zhì)的相互作用，如在離心法中，游離的水溶性藥物因其良好的溶解性會分布于上清液中，而脂質(zhì)體則位于沉淀中；相反，對于脂溶性藥物，在較低的離心強(qiáng)度和短的離心時間下，游離藥物不溶于水而沉淀，脂質(zhì)體位于上清液中；對于多囊脂質(zhì)體的包封率測定，由于其較大的粒徑，采用低速離心法能較好地將游離藥物分離并防止脂質(zhì)體的破壞。除了上述方法，為了提高包封率測定結(jié)果的準(zhǔn)確度，LV等采用實(shí)時成像技術(shù)對待測的納米載體進(jìn)行熒光探針標(biāo)記，當(dāng)探針分子結(jié)合在納米顆粒中時，會發(fā)出近紅外熒光，當(dāng)納米載體降解時，它們被釋放到周圍的水介質(zhì)中，熒光立即熄滅，以熒光強(qiáng)度測定包封率，并評價了離心法、超濾法和凝膠滲透色譜的分離能力。結(jié)果表明，離心法有明顯的粒徑和尺寸依賴的分離趨勢，適用于粒徑和密度大的納米載體的包封率測定，超濾法和凝膠滲透法對納米載體的分離效果都較好，但凝膠滲透法對藥物的回收率較差。

2.5 體外釋放度

脂質(zhì)體在體內(nèi)發(fā)揮藥效的前提是包封藥物的有效釋放，藥物在脂質(zhì)體中的釋放速率是影響其藥理作用和藥代動力學(xué)的重要因素，如Yanagida等研究表明，通過優(yōu)化法舒地爾脂質(zhì)體的釋放率可提高法舒地爾治療腦缺血/再灌注損傷的療效。影響脂質(zhì)體體外釋放率的因素包括脂質(zhì)體制劑本身的特性以及制備工藝和測定方法。Hioki等發(fā)現(xiàn)，在阿霉素脂質(zhì)體體外釋放試驗(yàn)中，聚乙二醇化脂質(zhì)體表現(xiàn)出比非聚乙二醇化脂質(zhì)體更高的釋放率。Khatib等通過噴霧干燥法制備環(huán)丙沙星納米晶脂質(zhì)體，蔗糖含量高的脂質(zhì)體配方對環(huán)丙沙星脂質(zhì)體的釋放時間延長，并依此制成了可吸入的、藥物釋放可控的環(huán)丙沙星脂質(zhì)體。脂質(zhì)體的體外釋放行為也是仿制藥一致性評價的一項(xiàng)重要內(nèi)容，如創(chuàng)新藥兩性霉素B脂質(zhì)體AmBisome^?與其仿制藥Anfogen^?和Lambin^?相比雖然有相同的配方組成，但藥物有效性和安全性均不及原創(chuàng)藥，究其原因是仿制藥中兩性霉素B的快速釋放。因此，建立合理有效的體外釋放度測定方法對于脂質(zhì)體制劑的安全有效性和仿制藥開發(fā)有重要意義。目前的測定方法有取樣-分離法、膜擴(kuò)散法、新型的測定方法以及各國藥典中收載的釋放度測定方法的改進(jìn)方法。

2.5.1 取樣-分離法

取樣-分離方法是使用最為廣泛和簡便的方法，具體操作是將脂質(zhì)體混懸液置于透析袋中并溶于適宜的釋放介質(zhì)，通過水浴靜置或攪拌、搖床震蕩使脂質(zhì)體釋放，以預(yù)先設(shè)好的時間取樣并分離或過濾，測定釋放藥物的含量。由于方法簡便，成本低廉，取樣分離方法適用于藥物體外釋放度的前期考察，通過選擇不同的溫度、釋放介質(zhì)、攪拌速率或震動頻率來初步確定藥物釋放的條件。如高文慧等就采用取樣-分離方法研究了長循環(huán)嗎啡脂質(zhì)體的體外釋放特性，將長循環(huán)嗎啡脂質(zhì)體置于透析袋中并在含有磷酸鹽緩沖液的釋放介質(zhì)中攪拌，分別于0.5、1、1.5、2、4、6、8、12、24、48h取樣后離心取上清液，計(jì)算藥物累積釋放率。

2.5.2 反透析-槳法

透析法和反透析法區(qū)別在于待釋放藥物是置于透析袋內(nèi)還是透析袋外的釋放介質(zhì)中，透析法是檢測從透析袋內(nèi)釋放到介質(zhì)中的藥物，而反透析法是檢測從介質(zhì)中釋放入透析袋中的藥物。為了探討多囊脂質(zhì)體的釋放機(jī)制，Manna等以已上市的長效局麻藥布比卡因多囊脂質(zhì)體（Exparel^?）為研究對象，采用與反透析法相結(jié)合的槳法建立了一種新的體外釋放度測定方法，并利用原位光纖UV-Vis探頭置于透析袋內(nèi)，實(shí)時檢測藥物的釋放情況。和取樣-分離法相比，新方法能更好地控制釋放條件，得到藥物突釋、延滯期和二次釋放的3步釋放過程，闡釋了多囊脂質(zhì)體的釋放機(jī)制，探討了溫度、pH、攪拌速度、釋放介質(zhì)等因素對多囊脂質(zhì)體體外釋放度的影響。

2.5.3 柱切換HPLC法

傳統(tǒng)的離心、過濾或透析方法可能會影響藥物的釋放過程，例如藥物在離心或過濾過程中釋放，透析膜的釋放限制，釋放條件不易控制等，在實(shí)驗(yàn)過程中需要考慮這些因素的影響。Ohnishi等建立了柱切換HPLC法，能夠分別測定阿霉素脂質(zhì)體中的包封藥物和釋放的藥物（游離藥物），將阿霉素脂質(zhì)體以合適的濃度分散在HPLC玻璃瓶中，在預(yù)定溫度和時間取樣注入柱切換HPLC，游離藥物通過分離柱時被保留，而包封藥物被洗脫下來經(jīng)過萃取柱進(jìn)行萃取和分離，最終游離藥物和包封藥物分別通過分離柱和萃取柱分離，經(jīng)過分析柱的洗脫和分析后用紫外檢測器檢測，和傳統(tǒng)的透析方法相比，不存在膜滲透導(dǎo)致的釋放限制，也不需要復(fù)雜的前處理過程，不僅可以測定釋放率，還可以分析脂質(zhì)體的包封行為。

2.5.4 流池法

流池法對于研究難溶性藥物和特殊劑型的體外釋放行為有獨(dú)特的優(yōu)勢。相較于其他溶出方法，流池法有應(yīng)用于不同劑型的樣品池和可供選擇的流速，并且根據(jù)藥物特性，釋放介質(zhì)可采用開環(huán)或閉環(huán)模式，在體外釋放度測定方面有廣闊的應(yīng)用前景。已有文獻(xiàn)報(bào)道了采用流池法測定脂質(zhì)體體外釋放度的方法，如Tang等利用流池法測定了兩性霉素B脂質(zhì)體的體外釋放度，通過考察釋放介質(zhì)的種類和比例，釋放介質(zhì)溫度和流速，起始藥物濃度等因素，使兩性霉素B在沒有沉淀或脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)降解的情況下于24h內(nèi)釋放，建立的該方法能有效區(qū)分兩性霉素B原研制劑和2個仿制藥品的釋放行為。同樣地，Yuan等也采用流池法考察了多柔比星脂質(zhì)體的體外釋放行為，可用于區(qū)分不同制備工藝的多柔比星脂質(zhì)體的體外釋放特征。

2.6 微生物控制

由于脂質(zhì)體藥物的給藥途徑以腸道外給藥為主，因此無菌檢查、微生物限度檢查、熱原和細(xì)菌內(nèi)毒素檢查等對于評價脂質(zhì)體制劑的安全性和免疫毒性很重要。由于脂質(zhì)體特殊的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，給脂質(zhì)體制劑的微生物控制帶來了一系列挑戰(zhàn)。如在脂質(zhì)體生產(chǎn)中，傳統(tǒng)的滅菌技術(shù)如加熱滅菌、化學(xué)滅菌和射線滅菌法對脂質(zhì)體的滅菌具有一定的局限性，可能導(dǎo)致脂質(zhì)體泄露、微粒聚集以及脂質(zhì)降解等問題，而超臨界流體由于其化學(xué)惰性，對細(xì)菌、病毒、芽孢等具有強(qiáng)大的滅活能力并能實(shí)現(xiàn)低溫滅菌，在醫(yī)療器械、天然生物材料、食品的滅菌過程中均有所應(yīng)用，或許可以成為脂質(zhì)體滅菌的潛在方法?！吨腥A人民共和國藥典》規(guī)定靜脈用注射劑應(yīng)按各品種項(xiàng)下的規(guī)定進(jìn)行熱原和細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查，并符合規(guī)定，然而，脂質(zhì)體在一定情況下會干擾鱟試劑的測定，因此需要選擇并開發(fā)針對納米微粒的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測技術(shù)。如潘衛(wèi)松等在探討多西他賽脂質(zhì)體的細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測方法時，直接采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET檢查用水）溶解稀釋樣品，會對鱟試劑的檢測有增強(qiáng)干擾的作用，而用60%乙醇溶液溶解樣品再用BET檢查用水稀釋數(shù)倍后，不再產(chǎn)生干擾。孫丹在檢測依托泊苷脂質(zhì)微球注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素時同樣采用了此方法。這可能是由于細(xì)菌內(nèi)毒素，即革蘭陰性細(xì)菌外壁的脂多糖能夠和脂質(zhì)體表面的脂質(zhì)結(jié)合，干擾鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素的凝集反應(yīng)而影響實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確度，而60%乙醇溶液或表面活性劑能夠溶解并破壞脂質(zhì)結(jié)構(gòu)，避免了脂質(zhì)對鱟試劑的干擾。同時，也有報(bào)道采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UHPLC-MS/MS）檢測脂多糖結(jié)構(gòu)中的羥基脂肪酸，建立了一種沒有納米顆粒特異性干擾的靈敏的細(xì)菌內(nèi)毒素檢測方法。